《多糖的分子量与分子量分布测定法》
出处: 西药部颁 第6册
拼音名:
英文名:
书页号:E6-附录3
多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法(中国药典1995年版二部附录ⅤD)测定。
1.对仪器的一般要求 所用仪器为高效液相色谱仪。色谱柱为测多糖专用凝胶柱,根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。检测器为示差折光检测器单用,有时亦可与紫外检测器联用。
2.系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。
(1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]>)<2>
(2)K<[d]>=t<[R]>-t0/tT-t0
式中W<[h/2]>为半峰宽;
t<[R]>为供试品峰的保留时间,用于测柱效时,指葡萄糖峰的保留时间;
t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间,一般指蓝色葡聚糖的保留时间;
tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间,一般指葡萄糖的保留时间。 更多:https://www.bmcx.com/
3.测定法 (1)系统校正 根据供试品分子量大小,一般选用5个已知分子量的多糖标准品(常用的为葡聚糖dextran),分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液,分别注入25μl标准品溶液,记录示差色谱图。由GPC专用软件绘制标准曲线。线性回归方程为:
logM<[w]>=a+bRT式中 M<[w]>为标样的已知重均分子量; RT为标样的保留时间。
(2)样品测量 注入25μl供试品溶液,记录示差色谱图,分子量计算如下:
Mn=ΣRI<[i]>/Σ(RI<[i]>/M<[i]>
Mw=Σ(RI<[i]>M<[i]>)/ΣRI<[i]>
D=Mw/Mn式中 Mn为数均分子量;
RIi为样品i级分的物质量,即示差色谱图的峰高;
Mi为样品i级分的分子量,即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。
4.结果处理 采用GPC专用软件,可获得样品归一化色谱图,微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。
英文名:
书页号:E6-附录3
多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法(中国药典1995年版二部附录ⅤD)测定。
1.对仪器的一般要求 所用仪器为高效液相色谱仪。色谱柱为测多糖专用凝胶柱,根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。检测器为示差折光检测器单用,有时亦可与紫外检测器联用。
2.系统适用性试验 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。
(1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]>)<2>
(2)K<[d]>=t<[R]>-t0/tT-t0
式中W<[h/2]>为半峰宽;
t<[R]>为供试品峰的保留时间,用于测柱效时,指葡萄糖峰的保留时间;
t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间,一般指蓝色葡聚糖的保留时间;
tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间,一般指葡萄糖的保留时间。 更多:https://www.bmcx.com/
3.测定法 (1)系统校正 根据供试品分子量大小,一般选用5个已知分子量的多糖标准品(常用的为葡聚糖dextran),分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液,分别注入25μl标准品溶液,记录示差色谱图。由GPC专用软件绘制标准曲线。线性回归方程为:
logM<[w]>=a+bRT式中 M<[w]>为标样的已知重均分子量; RT为标样的保留时间。
(2)样品测量 注入25μl供试品溶液,记录示差色谱图,分子量计算如下:
Mn=ΣRI<[i]>/Σ(RI<[i]>/M<[i]>
Mw=Σ(RI<[i]>M<[i]>)/ΣRI<[i]>
D=Mw/Mn式中 Mn为数均分子量;
RIi为样品i级分的物质量,即示差色谱图的峰高;
Mi为样品i级分的分子量,即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。
4.结果处理 采用GPC专用软件,可获得样品归一化色谱图,微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。
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